Odczyny barwne na aminokwasy

Odczyny barwne na aminokwasy, Naukowe PL, Aminokwasy

[ Pobierz całość w formacie PDF ]
Denaturacja białek. Odczyny barwne na aminokwasy i białka. Oznaczanie białka met.
Lowrye’go
Denaturacja białek
Zmiany konfirmacyjne łańcucha polipeptydowego na skutek, czego białko swoje typowe
rodzime właściwości traci. Dochodzi do deformacji kształtu cząsteczki, bez hydroli-
tycznej degradacjiłańcuchapolipeptydowego.Następujezaburzeniewiązaństabilizujących
przestrzenna strukturę białek.
(wiązania wodorowe miedzy grupami =CO i =NH wiązań peptydowych, oraz między
grupami funkcyjnymi łańcuchów bocznych, wiązania jonowe (grupy -COO
-
i -NH
3
+
,
oddziaływania hydrofobowe – aa niepolarne – alifatyczne i aromatyczne), wiązania
koordynacyjne za pośrednictwem metali.
Rozerwanie wiązań i utworzenie nowych innych zmieniających strukturę cząsteczki
Denaturacja prowadzi do:
·
Utraty właściwości biologicznych – enzymatycznych, antygenowych, hormonalnych
Nie należy mylić denaturacji z koagulacja!!!!
- nie zawsze denaturacji towarzyszy wypadanie z roztworu
- nie zawsze wypadanie białka z roztworu świadczy o denaturacji
Denaturowane białko wypada z roztworu w pI (pH punktu izoelektrycznego)
Denaturację powodują czynniki:
fizyczne
:
- temperatura, wysychanie, ultradźwięki, promieniowanie, wstrząsanie wodnych roztworów
w atmosferze powietrza
-
chemiczne
– kwasy, zasady, jony metali ciężkich, chlorowodorek guanidyny, mocznik,
detergenty, fenol, chloroform, alkohole, aceton
Ćwiczenia: s. 243-246
6,9
Cieplna denaturacja i koagulacja białka
6,10
Działanie rozpuszczalników organicznych
6,11
Strącanie białka za pomocą kationów (sole met ciężkich) Fe, Cu i Pb
6.12
Strącanie za pomocą anionów
Odczyny barwne:
6.13
Reakcja
biuretowa Piotrkowskiego
Reakcję dają związki mające, co najmniej 2 przylegające do siebie wiązania peptydowe.
Dwa przyległe –CO-NH- tworzą wiązanie koordynacyjne z atomem miedzi –
barwny kompleks. Nazwa pochodzi od biuretu – związku powstającego przy ogrzewaniu
mocznika do 180
o
C.
6,14
reakcja ninhydrynowa
.
(s. 246) Aminokwasy pod wpływem ninhydryny ulegają utlenieniu poprzez aminokwasy
do amoniaku, dwutlenku węgla i aldehydu uboższego o 1 C. Wwyniku kondensacji 2 cz.
1
Denaturacja białek. Odczyny barwne na aminokwasy i białka. Oznaczanie białka met.
Lowrye’go
ninhydryny zredukowanej i utlenionej z amoniakiem powstaje filoetowoniebieskie
zabarwienie.
6.16
Reakcja
Adamkiewicza i Hopkinsa na tryptofan
Pierścienie indolowe dwóch cząsteczek tryptofanu kondensuję z kwasem mrówkowym dając
barwny produkt (fioletowy pierścień na granicy faz)
6.17.
Reakcja
Sakaguchi na argininę
Grupa guanidynowa argininy w zasadowym roztworze z a-naftolem daje czerwony
kompleks
6.18
Reakcja cystynowa
Białka w czasie ogrzewania z ługiem ulegają hydrolizie. Siarka cysteiny i cystyny ulega
uwolnieniu w postaci jonów siarczkowych. S
-
z jonami Pb
2+
czarny osad PbS.
Metionina nie daje dodatniego wyniku tej reakcji.
6,19
Reakcja Liebermana
Reakcja charakterystyczna dla glikoprotein. W czasie ogrzewania ze stężonym roztworem
HCl następuje hydroliza białka, a z cukrów powstają pochodne furfuralowe.
Z uwolnionymi fenolami (z białek) powstaje fioletowo zabarwiony produkt.
6.22
Ilościowe
oznaczenie białka metodą Lowry'ego
.
Kombinacja reakcji biuretowej oraz reakcji miedzy resztami tyrozyny, a odczynnikiem
Folina
_
Ciocateu. 100 razy czulsza od metody biuretowej, ale przy jej wykonaniu ważne jest
zastosowanie takiego wzorca, w którym znajduje się podobna ilość tyrozyn. Poszczególne
białka, w zależności od składu aa (ilości tyr) dają roczne natężenia barwy z odczynnikiem
F-C. Konieczne odpowiednie wzorce - tu BSA.
Po dodaniu odczynnika
Folina-Ciocalteu
należy natychmiast zamieszać próbę! Kwas
fosforomolibdenowy redukuje się szybko do tlenków w pH 10, poza tym w tym pH kwas
fosforomolibdenowy jest nietrwały i ulega hydrolizie do kwasu ortofosforowego i
molobdenianu!!!
2
[ Pobierz całość w formacie PDF ]

zanotowane.pl

doc.pisz.pl

pdf.pisz.pl

happyhour.opx.pl